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超全干货!病理实验动物取材步骤注意事项(含不同脏器取材细节)

发布时间:2025-11-21
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作者:东极药物

在病理实验中,对不同部位组织进行取材是实验能够顺利进行的第一步,也是获得有效数据的关键。因此,本篇文章带大家了解病理实验动物【取材】的详细步骤及注意事项。一、取材前准备(1)取材用具:动物固定板、外科手···


在病理实验中,对不同部位组织进行取材是实验能够顺利进行的第一步,也是获得有效数据的关键。因此,本篇文章带大家了解病理实验动物【取材】的详细步骤及注意事项。



一、取材前准备

(1)取材用具:动物固定板、外科手术刀、镊子、解剖剪刀、滤纸纱布、固定容器、固定液、实验记录本等。如果需要对脏器进行称量或拍照记录,还需准备天平、尺子、标签等。

(2)试剂:麻醉剂、固定液、生理盐水等。

(3)废物存放:有明显标志的黄色垃圾袋用于存放动物尸体和废弃脏器。锐器盒用于存放废弃针头、刀片、注射器等。


二、取材基本要求

  • 动物麻醉及处死过程要迅速,这是动物伦理的要求,也可避免动物组织出现死后自溶而影响实验结果的准确性。

  • 取材时,对动物模型的外表及脏器进行肉眼观察并做实验记录。

  • 对取材样本要熟悉,所有组织取材要迅速,对于易自溶组织,如肠道、腺体等要优先处理。

  • 取材用的剪刀、刀片要锋利,镊子尽量不要使用齿镊,镊子不能直接夹住脏器组织,尽量用无齿镊夹住脏器周围结缔组织取材。

  • 如无特殊要求,所选组织应尽量包括脏器全部层次结构或者重要结构。若相同器官取材时,选材部位应尽量保持一致。

  • 剖检最好在设有解剖台的解剖室内进行,小动物可在大小适宜的搪瓷盘内剖检。剖检完毕,应及时对用具、场地进行严格消毒,特别对死于传染病尸体时,要严防病原扩散。

  • 尸体及时收入冰柜,按医疗垃圾处理办法进行及时处理。

*注:动物尸检常被忽视的体表检查也是极其重要的,如四肢水肿提示动物生前患有心脏、肝脏、肾脏或关节炎症等疾病;尾巴坏死通常是外伤引起(夹伤、打斗等),也有可能是注射时损伤血管导致血液供应不足造成的坏死;天然孔如口腔、鼻孔周围有血液,常常是食道或上呼吸道损伤;肛门周围污秽则提示动物生前有腹泻现象,多患有肠道疾病等。


三、病理实验动物各脏器取材细节

(1)消化系统

  • 胃:大、小动物均于胃底长轴矢状切取材,长1~2cm,宽0~3cm,包括消化道全层。小动物包括前胃和腺胃。大动物包括贲门、幽门、大弯和小弯。有可视病变如胃炎、胃溃疡,应取病变组织和周围少许正常组织。

  • 肠:分别在十二指肠逆行部和反迥部各取1块全层结构组织。小肠分别在空肠及回肠末端各取1块全层结构组织;大肠分别在结肠和直肠各取1块全层结构组织。所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性, 一般取长度为1~2cm。

  • 肝脏:在最大的肝叶各取1块组织(包括包膜),所选组织不宜太大。取材大小上,小动物为1.0cm*1.0cm*0.5cml,大动物3.0cm*2.0cm*0.5cm。但肝脏取材厚度不应超过0.5cm,否则固定液渗透不足,周定不够,影响脱水和切片,作免疫组化用途取材1.0cm*1.0cm*0.2cm。如有可视病灶取材,应包括病灶和其临近的正常组织两部分,可先切取大块,固定数小时至过夜,再修组织并换内定液继续固定。有胆囊的动物应取胆囊壁取组织。

  • 胰腺:所取材料应尽量保持肉服标本的完整性,大小为1.5cm*1.5cm*0.2cm。

(2)呼吸系统

  • 肺脏:取两肺下叶利肺尖部组织各一块(包括胸膜),大小为1.5cm*1.5cm*0.5cm。若有病变可根据病变人小与多少加取组织块。

(3)泌尿系统

  • 肾脏:左石肾脏各取1块,选取的组织材料应包括肾脏主要结构,即皮质、髓质、肾乳头及被膜等各层结构。大小为1.5cm*1.5cm*0.5cm

  • 膀胱:取膀胱织1块,包括全层结构,人小为1.5cm*1.5cm。若有可视病变,加取病变及周围组织。

(4)生殖系统

  • 因生殖器官体积较小,可整体取材固定后,再分别取睾丸、附睾、前列腺(大动物)左外侧缘及中间部各一块。

  • 子宫是一个中空脏器,官颈暴露了外界环境、易于发病且宫颈易发生肿瘤子宫体积较人,目药物对肌层、内膜均可能有影响,所以应取全层。子宫、宫颈(全层)及卵巢各取1块组织,大小为1.5cm*1.5cm*0.2cm。

(5)内分泌系统

  • 甲状腺:因其较小,应整体取材,并用纱布包裹再固定,包括甲状旁在内。

  • 肾上腺:左右肾上腺整体取材、固定。

(6)循环系统

  • 心脏:左右心室各取一块组织,应包括瓣膜、心室壁各层结构及冠状动脉,大小为1.5cm*1.5cm*0.5cm。若疑有心脏传导系统病变时,应按其相应解剖部位取材检查。

(7)免疫系统

  • 脾脏:脾脏是一个免疫器官,而现在很多疾病都利免疫功能有关,可引起脾脏增生等疾病,所以检查脾脏必不可少。取1~2块组织,包括包膜,大小1.5cm*1.5cm*0.5cm。有病变时加取病变组织。

  • 淋巴结:一般取颈部、腋下、肠系膜淋巴结,其质地应与周围组织较易区分,用镊子将其与周围组织分离开,取出。较小淋巴结整体取材成定,较大淋巴结切取1.5cm*1.5cm*0.5cm的组织块。

  • 胸腺:胸部器官取出前应先取出胸腺。胸腺组织易破坏,应特别小心。取胸腺组织一块并带包膜,大小为1.5cm*1.5cm*0.5cm。

(8)神经系统

  • 大脑:大鼠和小鼠应整体取材,并用纱布包裹固定。对较大动物,如犬,应在两大脑中央前后区、海马及基底结等处各取1块,大小均为1.5cm*1.5cm*0.5cm。

  • 小脑:小脑位于大脑半球的后方,经大脑横裂将人脑和小脑分开,取出小脑。小动物整体取材并用纱布包裹固定;大动物取1块组织,大小为1.5cm*1.5cm*0.5cm,包括小脑中间部。

  • 垂体:从蝶骨垂体窝中取山垂体。注意动作一定要轻柔,以免破坏乖体。将平体整体取材,州纱布包裹后整体固定。

  • 脊髓:自颅底至底椎沿背部中线切开皮肤,剥离棘突与椎板上的骨膜、软组织等,在靠近棘突两旁向下用锯垂直锯开,动作小心,勿损价脊髓。下端在荐椎利尾椎交界处横行锯开,用钳从上向下掀起已分离的棘突利椎板,暴露出硬脊膜,沿硬脊膜外切断各神经根,用镊子夹住硬脊膜向外轻拉,将硬脊膜和脊髓一起取出。然后沿脊髓前后正中线剪开硬脊膜,注入固定液。
    脊髓检查:固定数日后取出并彻底冲洗,在脊上作多个横断面,检查切面有无异常。
    脊髓取材:分别于颈、胸、腰阶段各取一段组织,长0.5cm。


四、注意事项

①若发现肉眼可视病变,应认真观察并取准病变部位组织,切勿漏取,以确保全面反映组织病变全貌,并需由表及里地观察病变状况,测重量、记录部位、体重等。

②根据实验方法、目的、病变、特殊病变等要求,尽量多取材,选取的组织材料要包括各脏器的主要结构部分。

③应避免选取因解剖失误造成的凝血块和坏死组织等。

④取病理材料时勿压挤(组织变形)刮抹(组织缺损)、冲洗(红细胞和其他细胞吸水肿胀破裂)。

⑤所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性,不宜过厚或过薄,建议选用1.5cm×1.5cm×0.5cm的取材规格。

⑥组织分离时,注意钝性分离不能用器械直接夹伤组织;脏器上附有血液、黏液等污物时,应用生理盐水冲洗后再固定,如果血液过多导致固定液变色时,应更换固定液。

⑦胃肠标本应将内容物冲洗干净再进行取材。

⑧肝肾等较大脏器可先将其切成较薄的块状组织固定,或是稍固定后再切成片状继续固定。

⑨垂体、肾上腺、甲状腺等小组织,应平铺于滤纸上再固定。


五、取材后病理分析注意事项

①常规HE染色,切片厚度需要根据不同组织类型而定。

②光镜下首先区分有否特异性病变及范围,然后由脏器一端向另一端进行整体观察和描述。

③观察小动物脏器有否肿大、增生,用10倍镜由一端开始计数该脏器包含的10倍镜镜头视野数,或计数整个切片中功能单位数。如脾生发中心、胸腺小叶、肝小叶、肾小球及整个切片中病变灶数量。

④大动物脏器疑有肿大、增生时,用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。心肌、骨骼肌在与长轴平行的切面上计数每一视野直径中的肌纤维数、肝小叶中肝细胞索数(数40倍镜视野的一半)。根据需要计数10~20个40倍镜视野。

⑤确定病灶大小后用40倍镜头进行观察。先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切,再观察该病灶在这一视野中的比例。

⑥实验动物肿瘤发生率的计算:动物肿瘤的组织分化常常不明显,在长期毒性试验或诱癌实验中出现的肿瘤,不论良性还是恶性,均计入肿瘤发生数,并计算肿瘤发生率。


六、实验动物组织电镜取材注意事项及要求

电镜生物样品取材的正确与否,决定着实验结果的准确性。因此,电镜要求样品必须忠实地反映其生活时的状态,应尽量避免“死后改变”和“人为假象”的发生。

电镜取材时的注意事项有:

①取材部位要准确。器官、部位要准确,如观察肾小球需取肾皮质而不要取到肾髓质。

②动作迅速。活体(血供未断)取材,离体后需在1min内放入固定液(戊二醛)使组织尽可能保持原来的生活状态。

③材料体积要小。一般不超过1mm3使组织得到均匀而充分的固定,需要定向包埋的样品(如皮肤肌肉、血管等)应修成1mm×1mm×3mm。

④机械损伤要小。取材应用锋利、清洁的双面刀片(新刀片应用酒精去除刀锋上的油脂),尽量避免牵拉和挤压。

⑤低温。固定液4℃保存,取材所需器械应进行预冷,取材过程在冰盒上进行,取好的样品放在含固定液的小瓶中4℃保存,尽量降低酶的活性,减少细胞的损伤。


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